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[Gram staining 시약 원리]
① 염색시약 (Gram Crystal Violet)
- 염기성 색소
- 제 1 단계
- 그람 양성균과 그람 음성균 모두 Crystal Violet 으로 염색되어 보라색으로 관찰됨
② 착색시약 (Gram Lugol-iodine)
- Crystal Violet 과 함께 반응하여 세포 내에 불용성 복합체를 형성함
- Crystal Violet에 의해 염색된 세포들에 대하여 친화력을 증진시키는 역할을 함
- 이 과정 또한 그람 양성균과 그람 음성균 모두 Crystal Violet으로 염색되어 세포가 보라색으로 관찰됨
③ 탈색시약 (Gram Alcohol Decolorizer)
- 탈색 역할
- 착색된 세균에 탈색제인 알코올을 처리함
- 세균의 세포벽에 존재하는 지방질을 용해시켜 Crystal Violet과 Gram-iodine의 화학적 복합체를 떨어져 나가게 함
- 그람 양성균 : 지방질이 존재하지 않으므로 (lipopolysaccharide 존재 X) 해당 시약에 의해 용해되지 않고 Crystal Violet과 Gram-iodine의 복합체가 염색되어 있는 상태를 유지하게 됨, 알코올이 두꺼운 peptidoglycan 층을 수축시켜 염료가 빠져 나갈 수 있는 구멍을 막음
- 그람 음성균 : peptidoglycan 층이 얇아서 분자 사이에 더 큰 구멍이 뚫려있음, 해당 시약을 처리하게 되면 outer membrane이 용해되면서 Crystal violet과 Gram-iodine 복합체가 제거되고 그람 음성균의 세포벽 구멍은 더 커짐
★ 그람 양성균은 보라색을 유지하지만 그람 음성균은 보라색의 염색 시약이 씻겨져 투명하게 되는 것이 보임
④ 대조염색시약 (Gram Safranin)
- 분홍색의 염기성 색소
- Crystal Violet 과 Gram-iodine의 복합체를 유지하고 있는 그람 양성균에는 영향을 주지 않기 때문에 보라색을 유지함
- 백색으로 탈색되었던 그람 음성균은 분홍색으로 염색됨
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