[화장품 효능 연구] Cell subculture (세포 배양법) _ Suspension cell

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* 세포 배양(Cell subculture)은 비단 화장품 효능 연구 뿐만 아니라 세포를 다루는 모든 실험의 기본이다.
 

부유세포 배양법 (floating cell subculture)

 - 부유세포는 floating cell 또는 suspension cell이라고 부름.
 - 증식하기 위해 표면에 부착할 필요가 없는 세포이며, 혈액에 존재하는 대부분의 면역 세포들이 속함. (출처 : Google) 
- 세균과 유사하게 계대 배양을 함.
 - 탈착 과정(trypsin 처리 등)을 필요로 하지 않으며 전체적으로 부착 세포보다 시간이 더 적게 소요되고, 세포를 유지하기 위해서는 주로 배양 세포를 희석시키거나 계대 배양 없이 단순히 media의 양을 증가시킴으로써 지속적으로 배양할 수 있음. (출처 : WELCENE 웰진)
 -  세포 배양 조건 : 37℃, 5% CO2, 95% 공기의 조건이 갖춰진 배양기(incubator)에서 배양함.
 

 2. suspension cell subculture protocol

 - 위에 기재한 내용과 같이 세포를 희석시키거나 media 양을 추가하는 방법도 있지만, T175 -> T175 flask 교체 기준으로 작성하였음.
 
 1) Media의 색깔, cell density 확인 후 subculture를 시작함.
 2) flask 안에 있는 media (= cell) 을 50mL conical tube에 넣고 원심분리를 함. (본인은 1500~2000 rpm, 2분 30초 ~ 3분으로 진행하였음.)
 3) 상층액과 침전물(cell의 pellet)을 확인 후 tube를 기울여 상층액을 suction 함. 이 때, pellet에 suction tip이 닿지 않게, pellet이 빨려들어가지 않게 조심하여야 함.
 

pellet 조심하면서 suction 진행할 것.

 
 4) new media 1 ~ 10mL을 넣고 충분히 pipetting mix (suspension) 하여 cell을 살살 풀어줌. 
 5) 다시 원심분리와 상층액 suction을 함. (washing의 개념.)
 6) new media 1mL을 넣고 충분히 pipetting mix (suspension) 하여 cell을 살살 풀어준 뒤, 9mL을 첨가함.
 7) new flask에 new media를 먼저 넣은 뒤 suspension한 cell을 넣어줌.
 8) Labeling 함. _ 세포명, 날짜, subculture 횟수 (passage number), 세포에 따른 media 이름 (ex. DMEM, RPMI), counting 하여 배양했으면 어떤 양으로 cell을 접종했는지 (ex. 3x10^5) 또는 몇 대 몇으로 배양했는지 (ex. 1:3), 실험자 이름
 9) Incubator 에 보관함.
 
 
※ subculture 할 때 새로운 flask에 cell을 어느 정도의 양으로 넣어야 하는지, 그 기준은 기재하지 않았다.
   cell counting 부분을 참고하면 되고, 본인이 원하는 cell의 양으로 계산하여 subculture를 진행하면 된다.