* Master hee 뚝딱뚝딱 화장품 채널 *
[실험 목적]
1. 강한 알칼리에서는 Flavonoid의 구조가 변하여 짙은 노란색이나 갈색으로 변하는데, 이같은 변색 반응을 통해 노란색에 해당하는 420nm의 흡광도에서 값을 측정하여 시료의 Flavonoid 함량을 측정하는 실험
- 플라보노이드 기본 구조
* Flavonoid
- Polyphenol류의 한 종류인 flavonoid는 자연계에 널리 분포하고 있으며, polyphenol과 같이 식물의 잎, 꽃, 과실, 줄기 및 뿌리 등 거의 모든 부위에 함유되어 있음.
- Flavonoid는 세포 손상을 초래하는 free radical을 효과적으로 제거하여 항산화 활성이 높다고 알려져 있으며, 항암 및 항균 활성 등 다양한 생리활성을 가지는 것으로 알려져 있음.
- 토마토 등에서 발견되는 물질로 항암, 심장 질환 예방 효과가 있는 것으로 여겨짐.
- 식품에 널리 함유되어 있음.
- 페닐기 2개가 C3 사슬을 매개하여 결합한 탄소 골격구조로 되어 있음.
- 산성에서는 안전하여 색이 더욱 선명해지지만, 강한 알칼리에서는 그 구조가 변하여 짙은 노란색이나 갈색으로 변함.
- 구리 · 철 등의 금속과 결합하여 흑갈색의 복합체를 형성하는데, 감자 등을 썰었을 때 칼에 닿은 자리가 청록색 또는 흑갈색으로 변색되는 것이 그 예임.
출처 : 김현우,조하늘,유병완,김지효,and 이태범. "찔레꽃 에탄올추출물의 생리활성과 화장품 방부효과." 韓國藥用作物學會誌 26.4 (2018): 308-316.
[필요 시약]
1) Diethylene Glycol
- MW : 106.12 g/mol
- Physical state : 액체상
2) Sodium hydroxide (NaOH)
- MW : 40.0 g/mol
- Physical state : 파우더상
3) Positive control
① Quercetin
- MW : 302.24 g/mol
- Physical state : 노란색 파우더상
- solvent : water
[실험 준비]
1. Diethylene Glycol은 reagent 그대로 사용함.
2. 1N NaOH는 필요량만큼 만듬.
3. Total polyphenolic content assay와 마찬가지로 standard curve를 만들어 positive control의 농도를 먼저 설정한 뒤, 이 중에서 시료의 한 농도를 설정함. 본인은 주로 polyphenol 실험에서 사용한 농도와 마찬가지로 실험을 진행하였음.
4. Water bath를 37℃로 미리 설정해둔다.
[실험 순서]
1. positive control을 농도별로 조제한다.
2. positive control의 농도와 대조할 sample의 농도를 결정 후 조제한다.
3. Test tube를 준비한다.
4. sample 칸에 농도별로 조제한 positive control, sample (한 종류의 농도)를 200㎕씩 처치한다.
5. Diethylene Glycol을 2000㎕씩 모든 칸에 처치한다.
6. 1N NaOH를 2000㎕씩 모든 칸에 처치한다.
7. 37℃로 설정해 둔 water bath에 1시간(60분)동안 반응 후 420nm에서 UV spectrophotometer로 측정한다.
* 거품 안 생기게 피펫팅 할 것.