* Master hee 뚝딱뚝딱 화장품 채널 *
[실험 목적]
1. 산화/환원 반응에 의한 '색변화'를 분광기로 측정하는 방법을 통하여 시료에 들어있는 총 페놀함량 (총 페놀의 양)을 측정하여 항산화 능력을 유추함.
- 실험에 사용되는 'Phenol reagent (F-C 시약, Folin-Cio calten's reagent)은 미량 단백질의 비색정량에 이용되는 시약이며 인몰리브덴산 (phosphomolybdic acid)과 인텅스텐산(phosphotungstic acid) 혼합액으로 이루어져 있음.
- 환원제(Tannin-like compounds)와 반응하여 복잡한 착제인 인몰리브덴산 블루를 형성하여 노란색에서 청색으로의 색 변화를 나타내는데, 이를 통해 UV-Vis Spectrophotometer로 총 폴리페놀의 양을 정량할 수 있음.
[필요 시약]
1) Phenol reagent (Folin-Cio calten's reagent)
- store at : 실온 보관
2) Na2CO3 (Sodium carbonate anhydrous)
- MW : 105.99 g/mol
- store at : 실온 보관
3) Positive control
① Gallic acid
- MW : 170.12 g/mol
- store at : 실온보관
- mp : 251℃
- solvent : water
② Tannic acid
- MW : 1701.20 g/mol
- store at : 실온보관
- mp : 218℃
- solvent : water
[실험 준비]
1. 10% Na2CO3
2. Standard Curve를 만들 농도를 설정함. ex) 0, 20, 40, 60, 80, 100ppm (Positive control 농도), 이 중에서 시료의 한 농도를 설정. 주로 본인은 100ppm으로 설정하였음.
'[실험 순서]
1. positive control를 농도별로 조제한다.
2. positive control의 농도와 대조할 sample의 농도를 결정 후 조제한다.
3. 96well plate를 준비한다.
4. sample 칸에 농도별로 조제한 positive control, sample (한 종류의 농도)를 50㎕씩 처치한다.
5. phenol reagent를 50㎕씩 모든 칸에 처치한다.
6. 실온에서 차광하여 5분 반응한다.
7. 10% Na2CO3를 50㎕씩 모든 칸에 처치한다.
8. 다시 실온에서 차광하여 1시간 반응 후 640nm에서 ELISA로 측정한다.
(※ UV spectrophotometer로 측정 시 Volume의 10배로 처치 양을 변경하여 측정함)
* 거품 안 생기게 피펫팅 할 것.
[Thesis search]
- 페놀성 화합물은 식물계에 널리 분포되어 있는 2차 대사산물의 하나로서 다양한 분자구조와 분자량을 가짐. 이들은 phenolic hydroxyl(OH)기를 가지기 때문에 단백질 및 기타 거대 분자들과 쉽게 결합하여 항산화, 항암 등의 다양한 생리활성을 가짐.
- 이들 대부분은 식물 기원으로 나무, 수피, 줄기, 잎, 과일, 뿌리, 꽃, 씨앗 등의 식물 모든 부분에 존재하고 있음.
- 현재까지 페놀 화합물 및 플라보노이드의 구조에 따른 항산화 활성과의 상관성에 대한 연구도 보고되었음.
- 폴리페놀계 물질들은 식물체에 특수한 색깔을 부여하고 산화·환원 반응에서 기질로 작용하며, 한 분자 내에 2개 이상의 phenolic hydroxyl(OH)기를 가진 방향족 화합물들을 가리키며, 플라보노이드와 탄닌이 주성분으로 충치예방, 고혈압 억제, 항에이즈, 항산화, 항암 등의 다양한 생리활성을 가짐.
배해병 ( Hae Byoung Bae ),김진철 ( Jin Chul Kim ),and 이진태 ( Jin Tae Lee ). "청정해역 울릉도자생약초를 이용한 화장품 약리활성 연구." 大韓本草學會誌 26.2 (2011): 67-73.