* Master Hee 뚝딱뚝딱 화장품 채널 *
[실험 목적]
1. 피부 단백질과 유사한 혈액 단백질(hemoglobin)을 사용하여, 시료의 수렴효과를 측정하여 모공 수축효과를 보아 시료가 화장품에 적용이 가능한 지 보는 실험.
2. Hemoglobin의 단백질이 시료와 결합하는 정도에 따라 수렴효과를 판단함.
[Hemoglobin 구조]
[Astringent (아스트린젠트)]
- 수렴성의, 아직 익지 않은 떫은 감을 먹었을 때의 느낌을 '수렴성' 이라 표현할 수 있는데, 이 수렴성은 탄닌(Tannin)이나 산이 과다하게 들어있을 때 나타남.
- 피부나 점막의 국소에 작용하여 단백질을 응고시켜 염증을 제거하고 피막을 만들어 보호하는 것 외에, 혈관을 수축시켜 지혈하거나 설사를 저지하는 약효가 있는 약제도 됨.
[Astringent effect 측정]
- 수렴제는 강한 단백질 결합 성질을 나타내는데, 수렴작용은 피부 단백질인 고분자 flavonoids와 가교적 결합 형태로 생성되어 피부가 수축하는 현상을 말함.
- 수렴작용에는 외용 혹은 내용 작용에 의해서 피부가 점막의 표면에 난용성 피막을 만들어 형성하고, 그 결과 국소를 보호하거나 혹은 조직을 조밀하게 하여 세포막의 투과성을 감소시키는 효과가 있다고 할 수 있음.
- 이러한 '수렴'이라는 뜻은 기본적으로 움추려서 주름진다는 의미를 가지고 있으며, 수렴제는 피부와 점막 혈관 등을 수축시키는 효과가 있어 세포 간극 및 림프 자극을 가로막아 점액의 분비를 억제시키는 효과가 있음.
- 피부에 작용하여 상처를 보호하고 진통 효과 및 세균 감염을 방지하는 효과를 가지며 모세혈관 벽의 투과성을 감소시키므로 혈장이 안에서 밖으로 유출되거나 백혈구가 소실되는 것을 억제하여 염증 및 지혈 작용을 함.
-> 참고 문헌 : 하고초 추출물의 생리활성, 눈개승마 추출물의 항산화 및 주름개선 효과
[필요 시약]
1) hemoglobin
- store at : 냉장 보관
- solvent : PBS
2) Positive control : Tannic acid
- MW : 1701.20 g/mol
- store at : 실온보관
- solvent : water
[실험 순서]
* D.R 값 : 2
1. hemoglobin을 0.5% ~ 1%의 농도로 조제한다.
2. ep tube(1.5mL tube)를 준비한다.
3. control 칸과 control blank 칸에 sample 용매와 positive control 용매를 700㎕씩 처치한다.
4. sample 칸과 sample blank 칸에 농도별로 조제한 sample과 positive control을 700㎕씩 처치한다.
5. 0.5 ~ 1% hemoglobin의 용매(PBS)를 control blank 칸과 sample blank 칸에 700㎕씩 처치한다.
6. 조제한 0.5% ~. 1% hemoglobin을 control 칸과 sample 칸에 700㎕씩 처치한다.
7. voltex를 친 후 5000 ~ 10000 rpm, 10분간 원심분리를 돌린다.
8. 상층액을 100㎕ ~ 200㎕을 취하여 96well plate에 처치한다.
9. 576nm에서 ELISA로측정한다.
10. 결과 확인.