[화장품_효능 연구] Hydrogen Peroxide Scavenging assay (H2O2) (활성산소 억제 실험)

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[서설]

H2O2 실험은 다른 실험에 비해 매우 간단한 실험이라 실패 확률이 낮은 실험이다. 그 전 실험들은 96well Plate를 사용하였지만 해당 실험은 Test tube를 사용한다.

 

[실험 목적]

1. 시료의 활성산소 (과산화수소) 억제력을 확인하는 실험.

 

[필요 시약]

1) Hydrogen peroxide - 40mM (in PBS)

- MW : 34.0147 g/mol / 순도 : 99.9

- store at : 냉장보관

 

2) PBS (Phosphate Buffer Saline, 인산완충식염수)

 

3) Positive control

- Ascorbic acid (Vitamin C) in EtOH / D.I.W

- store at : 실온보관

 

[실험 준비]

1. Hydrogen peroxide를 40mM (0.04M)의 농도로 PBS에 희석하여 제조

(희석 비율은 시약에 적혀있는 M을 참고하여 희석 진행)

2. Water bath 37℃ 세팅할 것, 타이머 준비

 

[실험 순서]

1. sample(타겟 시료)과 positive control를 농도별로 조제한다. (※ D.R 값 : 2)

2. Test tube를 준비한다.

3. control 칸과 control blank 칸에 sample 용매와 positive control 용매를 500㎕ 씩 처치한다.

4. sample 칸 sample blank 칸에 농도별로 조제한 sample과 positive control을 500㎕ 씩 처치한다.

5. 40mM Hydrogen Peroxide의 용매인 PBS를 control blank 칸과 sample blank 칸에 500㎕ 씩 처치한다.

6. 40mM Hydrogen peroxide를 control, sample 칸에 500㎕ 씩 처치한다.

 └ ★ 여기서, H2O2를 첫 칸에 넣은 후 10분 타이머를 시작하면서 처치해준다. 정지 시약이 없기 때문임.

7. 37℃ water bath에 10분 반응 후 320nm에서 UV spectrophotometer로 측정한다.

※ 거품 안 생기게 피펫팅 할 것.