[화장품_효능연구] Ferric Reducing Antioxidant Power (Potential) (FRAP) assay (환원력 실험)

* Master hee 뚝딱뚝딱 화장품 채널 *

 

클릭 시 카카오톡 채널로 이동 -*

 

 

 

[서설]

본 실험은 처치는 간단하나 준비 과정이 약간 복잡할 수 있어 준비 부분을 눈여겨 볼 필요가 있다.

 

[실험 목적]

1. 철 이온의 산화 상태 변화를 이용한 실험방법을 함으로써, 시료에 항산화 활성을 알아보는 실험.

 

[주의사항]

1. 항산화 실험 관련 시약은 산화주의 (광산화 포함)

2. Water bath 미리 켜두기

 

[필요 시약]

1) 2,4,6-tripyridyl-s-triazine (TPTZ)

- MW : 312.33 g/mol

- store at : 실온 보관

 

2) Sodium acetate

- MW : 82.0343 g/mol

- store at : 5 ~ 30 ℃ (실온 보관 진행하였음)

 

3) Acetic acid

- MW : 60.052 g/mol

- store at : 30℃ 이하에서 보관

 

4) Iron (Ⅲ) chloride (Ferric chloride)

- MW : 162.20 g/mol

- store at : 30℃ 이하에서 보관

 

5) Positive Control

- Ascorbic acid (Vitamin C) in EtOH / D.I.W

- BHA (Butylated hydroxyanisole) in 99 EtOH

- store at : 실온보관 (둘 다)

 

[실험 준비]

1. 0.3M Sodium Acetate buffer (pH 3.6) (Buffer 제조 방법은 SOD assay에 기재하였음.)

2. 10mM 2,4,6-tripyridyl-3-triazine (TPTZ) Solution (buffer는 40mM HCl로 하여 용해)

3. 20mM Ferric chloride in D.I.W

4. ①, ②, ③을 각각 10:1:1 (v/v/v)의 비율로 혼합하여 37℃에 10분동안 방치시켜 조제함.

 

 

[실험 순서] * 본 실험은 Control, Control · Sample Blank 칸이 없음

1. sample(타겟 시료)과 positive control를 원하는 농도별로 조제한다. (※ D.R 값 : 적용 안 했음)

2. Test tube를 준비한다.

3. FRAP reagent를 sample 칸에 각각 1500㎕ 씩 처치한다.

4. 농도별로 조제한 sample을 sample 칸에 30㎕씩 처치한다.

5. 37℃ water bath에 30분 반응 후 593nm에서 UV spectrophotometer로 측정한다.

 

 

* Acetic acid (아세트산)

Acetic acid

- 항균 및 항진균 성질을 갖는 합성 카르복실산

- 약산

- 탄수화물 대사를 억제하므로 이후에 유기체가 사망에 이를 수 있음

- 분자는 4개의 수소 원자, 2개의 탄소 원자 그리고 2개의 산소 원자로 구성되어 총 8개의 원자로 형성됨

- 지방산의 하나

- 식초 속에 3~5% 함유되어 식초의 신 맛을 내기 때문에 '초산'이라고도 하며, 에탄산이라고도 함

- pH 조절제, 소독제, 자극제